در این کارگاه حضوری استخراج DNA، شما به صورت کاملاً عملی و دستاول، روش سالتینگ اوت (Salting Out) را یاد میگیرید — یکی از بهترین، ایمنترین و مقرونبهصرفهترین روشهای استخراج DNA در دنیا.
این دوره مخصوص دانشجویان زیستشناسی، ژنتیک، بیوتکنولوژی، علوم آزمایشگاهی و علاقهمندان جدی به ژنتیک مولکولی طراحی شده است. در محیط واقعی آزمایشگاه ژنتیک پزشکی دکتر زعیمی، تمام مراحل را خودتان انجام خواهید داد: از لیز سلولها تا مشاهده کلاف سفید DNA و بررسی آن با الکتروفورز و نانودراپ.
بدون مواد سمی، بدون پیچیدگیهای فنل-کلروفرم، و با بازدهی عالی — دقیقاً همان چیزی که برای پروژههای دانشگاهی، پایاننامه و کار پژوهشی به آن نیاز دارید.
کارگاه عملی استخراج DNA به روش سالتینگ اوت
آیا تا به حال آرزو کردهاید که خودتان DNA را از خون استخراج کنید و آن را با چشم خودتان ببینید؟
آموزش استخراج DNA از خون به روش سالتینگ اوت (Salting Out)
روش سالتینگ اوت (Salting Out) یکی از محبوبترین و مقرونبهصرفهترین روشهای استخراج DNA در آزمایشگاههای آموزشی و پژوهشی است. این روش نسبت به روش فنل-کلروفرم بسیار ایمنتر و غیرسمیتر است و نیازی به مواد خطرناک ندارد. در این کارگاه حضوری، شما به صورت کاملاً عملی، استخراج DNA از خون را گامبهگام انجام خواهید داد.
مزایای روش سالتینگ اوت
هزینه بسیار پایین و مواد در دسترس
غیرسمی و ایمن برای محیط زیست و کاربر
مناسب برای نمونههای خون، بزاق و کشت سلولی
بازدهی بسیار بالا برای کاربردهای بعدی (PCR، الکتروفورز، sequencing)
محلولهای مورد نیاز (بافرها)
در این دوره طرز تهیه بافرهای مورد نیاز را یاد میگیرید:
بافر لیز کننده گلبول قرمز (RBC Lysis Buffer) ×۲۰
بافر لیز کننده هسته گلبول سفید
NaCl ۵ مولار
EDTA ۱۰ میلیمولار (pH=۸)
Tris ۱۰ میلیمولار (pH=۸)
TE Buffer (برای حل کردن نهایی DNA)
پروتکل عملی استخراج DNA از خون به روش Salting Out
۲ میلیلیتر خون تازه را در فالکون ۱۵ میلیلیتری بریزید و با بافر لیز گلبول قرمز به حجم ۱۳ میلیلیتر برسانید.
۱۵–۳۰ دقیقه روی شیکر و در یخ قرار دهید تا گلبولهای قرمز لیز شوند.
۱۰ دقیقه با سرعت ۱۸۰۰ دور در دقیقه سانتریفیوژ کنید و supernatant را دور بریزید.
(اختیاری) مرحله لیز را یک بار دیگر تکرار کنید تا رسوب کاملاً تمیز شود.
به رسوب، ۱٫۵ میلیلیتر بافر لیز هسته اضافه کرده و مخلوط کنید.
۴۵ میکرولیتر Proteinase K اضافه کنید.
۱۳۰ میکرولیتر SDS ۱۰٪ اضافه کرده و خوب مخلوط کنید.
نمونه را یک شبانهروز (یا حداقل ۳–۴ ساعت) در انکوباتور ۳۷ درجه قرار دهید.
۰٫۵ میلیلیتر NaCl ۵M اضافه کرده و ۱۵ ثانیه شدید تکان دهید.
۱۵ دقیقه با سرعت ۳۰۰۰ دور در دقیقه سانتریفیوژ کنید.
supernatant شفاف را به فالکون جدید منتقل کنید.
۴ میلیلیتر اتانول ۱۰۰٪ سرد اضافه کنید (آهسته و با احتیاط) — در این مرحله کلاف سفید DNA قابل مشاهده است.
کلاف DNA را با نوک سمپلر برداشته، به میکروتیوب منتقل کنید و با اتانول ۷۰٪ بشویید.
۲۰۰ میکرولیتر TE Buffer اضافه کرده و در ۶۵ درجه به مدت ۳۰ دقیقه یا ۳۷ درجه به مدت چند ساعت قرار دهید تا DNA حل شود.
نکته مهم: در مرحله اضافه کردن اتانول باید بسیار آهسته عمل کنید تا کلاف DNA کامل و یکپارچه تشکیل شود.
بررسی کیفیت DNA
در انتهای کارگاه، DNA استخراج شده توسط شما با دستگاه الکتروفورز ژل آگارز بررسی میشود و کیفیت آن (اندازه، خلوص و مقدار) ارزیابی خواهد شد. همچنین با استفاده از دستگاه نانودراپ غلظت، کیفیت و آلودگی DNA استخراجی بررسی خواهد شد.